如何區別活細胞和死細胞？

1.染色法

染色法分化學染色法和熒光染色法， 根據染色機理的不同， 染料或使死細胞著色， 或使活細胞著色。 死活細胞在生理機能和性質上的差異主要包括：

死活細胞細胞膜通透性的差異

活細胞的細胞膜是一種選擇性膜， 對細胞起保護和屏障作用， 只允許物質選擇性的通過；而細胞死亡之后， 細胞膜受損， 通透性增加。 常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質。 臺盼藍， 又稱錐藍。 是一種陰離子型染料， 不能透過完整的細胞膜。 所以經臺盼藍染色后只能使死細胞著色， 而活細胞不被著色，

甲基藍有類似的染色機理。 植物細胞的質壁分離也可鑒定死活。

死活細胞在代謝上的差異

采用美藍染料鑒定酵母細胞死活的依據， 美藍是一種無毒染料， 氧化型為藍色， 還原型為無色。 由于活細胞中新陳代謝的作用， 使細胞內具有較強的還原能力， 能使美藍從藍色的氧化性變為無色的還原型， 因此美藍染色后活的酵母細胞無色；而死細胞或代謝緩慢的老細胞， 則因它們的無還原能力或還原能力極弱， 使美藍處于氧化態， 從而被染成藍色或淡藍色。

熒光素雙醋酸酯（FDA）是一種常用的培養動植物細胞以及植物細胞原生質體的生活力鑒定染料， 其染色機理也利用了死活細胞在代謝上的差異：FDA本身不產生熒光，

也無極性， 能自由滲透出入完整的細胞膜。 當FDA進入活細胞后， 被細胞內的脂酶分解， 生成有極性的、能產生熒光的物質——熒光素， 該物質不能自由透過活的細胞膜， 積累在細胞膜內， 因而使有活力的細胞產生綠色熒光；而無活力的細胞因不能使FDA分解， 而無法產生熒光。

除此之外， 還有一些細胞器的專有染料。 如液泡系的專有染料中性紅， 中性紅是一種低毒性染料， 可以使活細胞液泡著紅色， 而細胞質和細胞核不被著色；死細胞的液泡不被著色或淺染， 染料彌散于整個細胞中， 細胞核和細胞質被染成紅色。 有時侯為了增加染色效果可以將兩種染料結合使用， 如甲基藍—中性紅混合染色法。

2.儀器分析法

可采用微電極技術（利用死活細胞膜兩側電位的差異）、全自動分析細胞記數儀和流式細胞儀等，

可對細胞的死活進行精確的批量檢測。

流式細胞儀法用來判斷細胞死活的常用熒光探針有二大類：一類是能透過活的細胞膜進入細胞內而發出熒光的物質， 例如FDA可被活細胞持留而發出黃綠色熒光， 若細胞有損傷則會從細胞中流失， 觀察不到熒光。 另一類是不能透過活細胞膜， 但能對固定的細胞及膜有破損的細胞的核進行染色， 例如碘化丙啶（PI,Propidium iodide ）和溴化乙錠（ EB,Ethidium bromide ）就是常用的第二類熒光探針。 碘化丙啶（PI）不能穿透細胞膜， 對于具有完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。 而對于壞死細胞， 其細胞膜的完整性喪失， 碘化丙啶（PI）可以染色壞死細胞。

目前常用的一種細胞凋亡與壞死檢測試劑盒則含有Hoechst 33342和碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）兩種熒光染料。 細胞發生凋亡時， 染色質會固縮， Hoechst 33342可以穿透細胞膜， 染色后凋亡細胞熒光會比正常細胞明顯增強。 上述兩種染料雙染后， 使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測時， 正常細胞為：弱紅色熒光＋弱藍色熒光， 凋亡細胞為弱紅色熒光＋強藍色熒光， 壞死細胞為：強紅色熒光＋強藍色熒光