人體衰老和多種疾病均與自由基有關,
尋找天然抗氧化劑具有重要意義。
黃酮、多糖、多肽、酚類等生物活性成分均具有抗氧化活性,
抗氧化活性的篩選方法可分為體外和體內2種測試體系。
體外:抗氧化活性可以用在特定條件下,
樣品對檢測體系中自由基的清除能力、抗油脂過氧化能力及樣品的還原能力、總抗氧化能力等來衡量和表徵。
常用的方法有羥基自由基(·OH)清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH法)、2,2-聯氮基-雙-(3-乙基苯並噻唑啉-6-磺酸)二氨鹽(ABTS法)、超氧陰離子自由基法(O2-·)、鄰苯三酚自氧化法、β-胡蘿蔔素漂白法、硫代巴比妥酸法、鐵離子還原能力測定(FRAP法)、總酚測定法、ORAC法等方法。
體內:主要有DNA氧化損傷法、蛋白質氧化損傷法、線粒體氧化損傷法。
其中DPPH法和ABTS法操作較簡單便捷,
不需要特殊的檢測設備,
只在需固定時間下記下其紫外分光光度測量值後計算其自由基清除率,
缺點是不同物質具有組成和結構的差異,
與 DPPH·、ABTS+·的反應速率不同,
反應到達平衡的時間不同,
將反應時間固定在某一值時,
可能對抗氧化劑的抗氧化性評價帶來錯誤的判斷,
且DPPH自由基會和其他自由基發生反應。
鄰苯三酚自氧化法缺點是檢測波長、緩衝液的組成及pH值、鄰苯三酚濃度等關鍵測定條件存在著較大差異。
β-胡蘿蔔素漂白法的缺點是β-胡蘿蔔素本身有抗氧化活性,
對樣品活性的測定結果有影響。
FRAP法主要用於食品業,
優點是簡單易操作、可以重複,
缺點是無法測定硫醇化合物的還原能力。
ORAC法是國際上通用的評價食品氧化的標準方法,
缺點是儀器成分較複雜,
檢測成本較高。
目前普遍使用的體外抗氧化活性指標一般都採用分光光度法,
使用分光光度計測量各種顏色成分含量的變化。
分光光度法操作較簡單、便捷,
不需要特殊的檢測設備,
只在需固定時間下記下其紫外-可見分光光度測量值後計算其活性大小,
具有成本低、效率高、樣品量少等優點。
分光光度法缺點是會受到樣本自身顏色和渾濁度的影響和限制,
顏色深的樣品測得的資料誤差大,
甚至得到錯誤的結果;不同物質組成和結構存在差異,
與各種自由基的反應速率不同,
反應到達平衡的時間不同,
將反應時間固定在某一值時,
可能對抗氧化劑的抗氧化性評價 帶來錯誤的判斷。
外界環境因素對實驗結果也存在一定程度的影響,
有些抗氧化活性實驗在冬天低溫時不易成功,
測得的資料往往沒有規律。
我覺得在測定樣品的抗氧化活性時,
各種方法都有自己的優缺點,
要根據需測物質來決定用什麼方法,
比如DPPH法的自由基選擇性強,
不和只有一個羥基的芳香酸、無羥基的類黃酮反應,
這類物質需用其他方法測定。
若對檢測結果要求高的可用ORAC法,
若是做兩個活性物質的抗氧化活性的對比可用多種方法測定後綜合比較。
在實際應用中,
要根據樣品的物理、化學特徵靈活採用多種方法綜合評價其抗氧化活性,
使實驗結果更加客觀和真實。